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免疫熒光細胞化學(xué)病理實驗

免疫熒光細胞化學(xué)病理實驗

型號:   更新時間:2024-11-09

簡要描述:

免疫熒光細胞化學(xué)病理實驗 免疫熒光細胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。

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免疫熒光細胞化學(xué)病理實驗介紹

免疫熒光細胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位,以及利用定量技術(shù)測定含量。

實驗原理及流程

將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

實驗流程

免疫熒光單標記方法

免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質(zhì)分子,方法比較簡單,只要按照染色步驟去做,通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇,固定液選擇的合適與否,可能會直接影響染色結(jié)果。

免疫熒光雙標記方法

免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子,當懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些,應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如:A抗體為多克隆抗體,來自家兔;B抗體為單克隆抗體,來自小鼠)。其次,兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊,且盡量遠離,通??梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下,染色時兩種一抗可以同時孵育,然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結(jié)果一種顏色非常弱,而另一種顏色比較強時,應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同免疫熒光單標記。

客戶提供

細胞株;細胞爬片;組織切片,一抗

公司提供免疫熒光細胞化學(xué)病理實驗

基本實驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析;

熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝。

實驗周期:1-3周


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