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ReadyAMP^®PCR直接擴(kuò)增技術(shù)應(yīng)用在油菜葉中的流程

基因工程油菜作為全球種植面積增長最快的作物廣受科學(xué)家的關(guān)注。而油菜籽擁有豐富的油脂含量，使得油菜成為一種十分重要的油料作物。常見的轉(zhuǎn)基因油菜方向包括品種改良、抗病、抗蟲、抗除草劑等，想要獲得一系列優(yōu)良品種，則需要面對(duì)大量待篩選葉片。目前實(shí)驗(yàn)室提取基因組DNA的技術(shù)手段很多，例如CTAB法、離心柱提取法。但是以上方法操作步驟多、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、效率極低，大大降低了實(shí)驗(yàn)室研究人員的積極性。一旦遇到田邊采樣，還面臨著采樣周期，快遞回實(shí)驗(yàn)室檢測等長周期檢測過程，無法做到即采即做。

從經(jīng)濟(jì)角度考慮，目前應(yīng)用于油菜葉片中提取基因組DNA的方法主要為CTAB法。該方法局限性很大，例如油菜葉取材量大、步驟多、離心步驟多、使用某些有毒有害試劑，且無法高通量操作。隨著田邊診斷的推進(jìn)，加上逐年增加的油菜葉檢測量，傳統(tǒng)方法已經(jīng)不能滿足實(shí)驗(yàn)室需求，我司開發(fā)的ReadyAMP^®油菜葉直接PCR擴(kuò)增試劑盒能夠快速、精準(zhǔn)檢測到目的基因。此方法優(yōu)點(diǎn)如下：

—對(duì)樣本量要求不高

—操作簡單快速

—不用液氮研磨

—不用離心

—不使用蛋白酶和有毒有害有機(jī)試劑

案例A 油菜葉片擴(kuò)增12對(duì)基因

RL：油菜葉片  +：植物基因組試劑盒提取基因組（20×） —：陰性對(duì)照

取油菜葉3mm，直接置于ReadyAMP^®油菜葉片直接PCR擴(kuò)增試劑盒（貨號(hào)Nu-RAR01）中，擴(kuò)增12個(gè)不同長度基因，用植物基因組提取試劑盒（貨號(hào)Col-D04）提取基因組為對(duì)照（基因組20×稀釋）。