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Thp-1細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享
更新時間:2021-08-25   點擊次數(shù):2205次

Thp-1細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

 

轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備:

1、轉(zhuǎn)染試劑用量10ul

2siRNA濃度:20um/L

3、細(xì)胞密度:1*106-1*105

4、轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板:6孔板

5、轉(zhuǎn)染試劑:Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑;貨號:AD600025

6、轉(zhuǎn)染時間:48小時

7、細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清

8、細(xì)胞凍存液:L0100無血清細(xì)胞凍存液
注意:本細(xì)胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。

THP1.png

 

 

操作過程:

1.提前1接種細(xì)胞細(xì)胞匯合度在60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2. 核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)基加入核酸復(fù)合物根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染24小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

5.分析結(jié)果質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達(dá)。

二、轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細(xì)胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,此技術(shù)成為新的全球蛋白功能、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。

三、優(yōu)秀表現(xiàn)

Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;

本轉(zhuǎn)染試劑是通過細(xì)胞內(nèi)?和細(xì)胞主動吸收進(jìn)入細(xì)胞;

本轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)入后對細(xì)胞膜無物理性損傷,不易出現(xiàn)細(xì)胞變形,保持高的細(xì)胞活力;

不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker;

可反映真實的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù);

可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等;

 

 

 


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