讓我們一起來了解一下什么是無血清培養(yǎng)基
更新時間:2020-07-14 點擊次數(shù):778次
無血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比,既能滿足細胞在體外長時間培養(yǎng)的要求,又能避免動物血清所帶來的不利因素。
無血清培養(yǎng)基的發(fā)展歷程分為無血清培養(yǎng)基(Serum-Free Medium,SFM)、無動物源培養(yǎng)基(Animal Component Free Medium,ACFM)、無蛋白培養(yǎng)基(Protein-Free Medium,PFM)及化學(xué)成分限定培養(yǎng)基(Chemically Defined Medium,CDM)等四類。
在使用無血清培養(yǎng)基時,有些細胞需要逐漸適應(yīng),即先將原來的培養(yǎng)基與無血清培養(yǎng)基混合培養(yǎng),漸漸地再轉(zhuǎn)為*的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。有些貼壁生長的細胞,復(fù)蘇時也可用少量的血清先培養(yǎng),因為血清可助細胞貼壁,然后再換成無血清培養(yǎng)基。
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
在不同細胞培養(yǎng)時,根據(jù)細胞需求對成分已知的基礎(chǔ)培養(yǎng)基組分進行適當調(diào)整即可使細胞更好地生長并提高目的產(chǎn)物的表達量。大多數(shù)人工合成的培養(yǎng)基如DMEM、DMEM/F12、1640。
補充因子
補充因子是代替血清的各種因子的總稱。多數(shù)無血清培養(yǎng)液必須補加3-8種因子。胰島素、亞硒酸鈉和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補充因子,其他多數(shù)為輔助作用的因子。按其功能不同,補充因子可分為五類:
激素和生長因子。很多細胞用無血清培養(yǎng)時需要加入激素,如胰島素、生長激素、胰高糖素等。胰島素是重要的細胞存活因子,與細胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成,抑制細胞凋亡。此外,雌二醇、孕酮、氫化可的松等也是無血清培養(yǎng)基中常添加的補充因子。
結(jié)合蛋白。常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白與細胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細胞獲取鐵元素的主要來源。白蛋白與脂類、激素、維生素、金屬離子和生長因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在無血清培養(yǎng)基中活性的作用,此外,由于牛血清白蛋白一般添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護細胞免受機械損傷。
貼壁因子。許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質(zhì),如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖粘連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞、CHO細胞等。
酶抑制劑。培養(yǎng)貼壁生長的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。
其他補充因子。一些細胞培養(yǎng)使用的無血清培養(yǎng)基還需要補充微量元素、維生素、脂類等低分子量物質(zhì)。