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瓊脂糖是用于什么樣的實驗你了解嗎?
更新時間:2020-03-18   點擊次數(shù):990次
   瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定 DNA、RNA 分子混合物,以瓊脂凝膠作為支持物,利用 DNA 分子在電場中時的電荷效應和分子篩效應,達到分離混合物的目的。DNA 分子在高于其等電點的溶液中帶負電,在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下,忽略DNA分子攜帶的電荷,DNA 分子的遷移速度取決于分子篩效應,即分子本身的大小和構型是主要的影響因素。DNA 分子的遷移速度與相對分子量成反比。
  不同構型的 DNA 分子的遷移速度不同。如環(huán)形 DNA 分子樣品,其中有三種構型的分子:超螺旋分子(cccDNA)、開環(huán)分子(ocDNA)、和線形 DNA 分子(IDNA)。這三種不同構型分子進行電泳時的遷移速度大小順序為:cccDNA>IDNA>ocDNA。
  核酸電泳通常使用瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠兩種介質(zhì)。瓊脂糖是一種聚合鏈線性分子;聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺(Acr)在 N,N,N′-四甲基乙二an(TEMED)和過硫酸胺(AP)的催化下聚合形成長鏈,并通過交聯(lián)劑 N,N′-亞甲雙丙烯酰胺(Bis)交叉連接而成。瓊脂糖凝膠適合分離200bp至近50kb的DNA片段,而聚丙烯酰胺凝膠對于小片段(5bp-500bp)的分離效果很好,且分辯力*。選擇不同濃度的凝膠,可以分離不同大小范圍的 DNA 分子。電場強度愈大,帶電顆粒的運動越快。但凝膠的有效分離范圍隨著電壓增大而減小,所以電泳時一般采用低電壓,不超過 6V/cm。而對于大片段電泳,可以選擇 0.5-1.0V/cm 電泳過夜。如果選擇高電壓電泳,可使用聚丙烯酰胺凝膠。
  1. 凝膠強度:衡量瓊脂糖性能的關鍵參數(shù),凝膠強度越高,凝膠性能越好,可以保證在低濃度下,凝膠性能依然很好,高凝膠強度瓊脂糖適合大分子核酸。
  2. 低電滲(Low EEO):電滲是一種物理現(xiàn)象,由于瓊脂糖這樣的多孔支持物在電場中會吸附水中的正負離子,而使溶液帶電向電極泳動,從而干擾核酸或蛋白電泳。
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