技術服務介紹
DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中，一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū)，起調控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%處于基因調控區(qū)的CpG島中。BSP甲基化測序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通過對基因組DNA進行重亞硫酸鹽處理，非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉變成尿嘧啶，在隨后的PCR反應中尿嘧啶轉變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基，在反應完成時被保留，我們將擴增得到的PCR產(chǎn)物進行TA克隆測序，就可以分析甲基化發(fā)生的具體情況。該方法實驗結果準確性高，是甲基化檢測的金標準。通過對疾病及正常對照樣本的靶基因進行甲基化分析，在研究腫瘤發(fā)生機制及早期診斷等方面均具有重要的臨床意義。
實驗流程
Q：常見的甲基化測定方法有哪些，優(yōu)缺點是什么？
常見方法 | 優(yōu)缺點 |
MSP法（Methylation-specific PCR，MSP）：重亞硫酸鹽處理基因組DNA，分別設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物，如果對甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。 | 無需挑克隆測序，步驟簡單，但對引物設計的要求較高，容易出現(xiàn)PCR假陽性，影響實驗結果分析。 |
BSP法（Bisulfite sequencing PCR ，BSP）：重亞硫酸處理基因組DNA，設計BSP引物擴增，將PCR產(chǎn)物克隆至T載體測序，分析CpG位點是否發(fā)生甲基化。 | 可明確樣本待測區(qū)段每個CG位點的甲基化程度；受實驗方法和價格因素限制無法高通量。 |
高分辨率熔解曲線法（High Resolution Melting ，HRM）：重亞硫酸處理基因組DNA，未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴增后轉變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，導致樣品中的GC含量發(fā)生改變后溶解溫度變化，從而進行分析。 | 檢測方法高通量，但是無法明確每個CG位點的甲基化程度。 |
客戶須知：
| 實物 | 數(shù)據(jù)信息 | 實驗周期 |
客戶提供 | 待測樣本 | 待測序列信息 | 7周或以上 |
我們提供 | 無 | 基本實驗步驟、測序報告、圈點圖 |
收費標準
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