一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
表格一：實(shí)驗(yàn)儀器
儀器 | 廠家 | 型號 |
細(xì)胞培養(yǎng)箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
激光共聚焦顯微鏡 | Leica | TCS SP5 |
表格二：試劑
試劑 | 廠家 |
細(xì)胞培養(yǎng)基 | Gibco |
PBS (0.1 M, pH 7.4) | 自配 |
4 %多聚甲醛溶液 | 索來寶 |
BSA | Sigma |
Triton-x-100 | 生工生物 |
FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗 | Santa Cruz |
DAPI | 碧云天 |
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
制作細(xì)胞爬片,根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行加樣操作；
反應(yīng) 24h 后，棄原有培養(yǎng)液， PBS 洗 1 次；
4％的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘，PBS 洗 2 次，5 分鐘/次；
4. 加入 0.1％的 Triton-x-100，室溫孵育 15 分鐘；
5. PBS 洗 3 次，5 分鐘/次；
6. 10％BSA 封閉 30 分鐘；
加入一抗 50μL（稀釋度為 1：100），4℃過夜孵育；
第二天復(fù)溫 30min，PBS 洗 3 次，5 分鐘/次；
每組分別加入 FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗 50μL（稀釋度為 1：500），37℃培養(yǎng) 30 分鐘；
PBS 洗 3 次，每次 5 分鐘；
11. DAPI 染色 5 分鐘；
PBS 洗 3 次，每次 5 分鐘；
在激光共聚焦顯微鏡上觀察（使用 405nm 和 488nm 的激發(fā)光源進(jìn)行熒光檢測）。
三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
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